Introduction

Le but de cette étude est de comparer les valeurs de PIO obtenues chez le chien à l'aide d'un nouvel appareil de mesure, le IOPvet® (Ingeneus, Victoria AUS) par rapport à un modèle établi (Tonovet Plus® Icare, FIN).

Matériels et méthodes

Une mesure de la PIO a été réalisée sur une cohorte de 50 chiens répartis en 2 groupes : un groupe A de 25 chiens (48 yeux) présentés en consultation d'ophtalmologie et un groupe B de 25 chiens (49 yeux) ne présentant aucun trouble oculaire. La mesure de la pression intraoculaire a été réalisée par un seul opérateur en respectant les recommandations du fabricant et les règles de bonne pratique. Un seul et même IOPVet® a été utilisé pour toute l'étude et était nettoyé après chaque utilisation. Les données issues du TonoVet plus® sont numériques, variables quantitatives faciles à aborder. Les données issues de IOPvet® sont des intervalles et doivent être considérées comme qualitatives. Les 2 ensembles de valeurs ne peuvent pas être comparés en l'état, il faut les transformer. Il s'agit d'utiliser des intervalles cliniquement cohérents, avec une zone 30 (pathologique). Une zone grise a été choisie car cette fourchette de valeurs semble être la moins fiable du dispositif IOPvet®. Deux t-test unilatéraux (test de Student) ont été utilisés pour l'analyse statistique. Une représentation graphique des zones d'équivalence et de l'intervalle de confiance a également été faite afin de valider visuellement les éléments obtenus par les t-tests.

Résultats

1. Chez les sujets sains : Pour le groupe B (sujets sains), l'équivalence entre les mesures est établie. Les valeurs se répartissant de 10 à 30mmHg sont toutes physiologiques et répétitives d'un dispositif à l'autre. Les tests statistiques ne sont pas nécessaires pour prouver que les mesures issues de l'IOPvet® sont équivalentes d'un point de vue clinique à celles obtenues avec le TonoVet plus®.
2. Chez les sujets venus pour motif ophtalmologique : Les t-test réalisés (par paires, unilatéraux) avec ces formats de valeurs ont montré que les estimations avec IOPvet® sont inférieures aux mesures avec le TonoVet plus® (p-value = 0.0031). Les intervalles étant choisis en fonction de l'utilité clinique de ces mesures, on peut conclure, pour la population de sujets atteints, que les 2 dispositifs ne sont pas équivalents. Les intervalles 10-15 et 15-20mmHg semblent être fiables et répétitifs entre les deux appareils. Les intervalles 20-25 et 25-30mmHg sont systématiquement sous évalués avec le IOPvet® avec un résultat erroné dans 37,5% des cas dans le premier intervalle et 77,78% dans le second intevalle. L'intervalle >30mmHg est quant à lui toujours exact.
3. Répétabilité des valeurs dans le temps avec IOPvet® Afin d'évaluer la répétabilité des mesures réalisées avec IOPvet® dans le temps on a divisé le groupe A en 3 périodes puis on a comparé les différences de classes cliniques données par les différents dispositifs. Le t-test comparant la période 1 à la 3 donne un résultat identique : il n'y a aucun effet période sur les données étudiées (p-value = 0,388) ceci témoignant la possibilité de réutiliser le IOPvet® à condition de respecter les consignes d'entretien.

Discussion

L'évaluation et le suivi de la pression intraoculaire (PIO) est essentielle dans le diagnostic et la gestion de différentes pathologies oculaires. L'interprétation de la PIO estimée est impossible sans information sur les valeurs de référence de PIO obtenues pour un tonomètre et une espèce donnés. A ce jour, aucune information n'est disponible dans la littérature concernant la fiabilité du IOPvet®. Le IopVet® apparaît comme un dispositif fiable pour apprécier des pressions intra-oculaires normales et supérieures à 30mmHg. Une zone grise est cependant présente pour les intervalles de 20-30mmHg pour lesquels le IOPvet® montre ses limites et une confirmation par un appareil de référence doit être de mise. La difficulté de notre étude réside dans le fait que nous avons comparé des données numériques quantitatives issues du TonoVet plus® avec des valeurs considérées comme qualitatives avec le IOPvet®.

Conclusion

Le faible coût de cet appareil, la possibilité de le réutiliser et sa relative fiabilité en font un outil susceptible d'être utilisé par les vétérinaires ne souhaitant pas investir dans un appareil onéreux comme le Tonovet Plus® ou les propriétaires de chien glaucomateux. Il serait intéressant de prolonger cette étude avec une cohorte plus importante de chiens présentant une hypertension intraoculaire ainsi que dans l'espèce féline.

Bibliographie

1. Barbosa SF, Raposo ACS, Dórea Neto FdA, Araujo NLLC, Oliveira MMS, Oriá AP. TonoVet Plus®: Higher reliability and repeatability compared with Tono-Pen XL™ and TonoVet® in rabbits. Vet Ophthalmol. 2022;25:272-281.
2. Ben-Shlomo G, Muirhead SF. Estimation of intraocular pressure in normal canine eyes utilizing the newly introduced TonoVet Plus and TonoPen Avia, and their comparison to the established TonoVet. Vet Ophthalmol. 2021;24(Suppl. 1):171-174.
3. Leiva M & All, Comparison of the rebound tonometer (ICare ® ) to the applanation tonometer (Tonopen XL ® ) in normotensive dogs. Veterinary Ophthalmology (2006) 9 , 1, 17-21.

Introduction

La contamination de l'environnement de travail demeure un sujet essentiel de santé au travail, particulièrement lors de manipulation de substances cytotoxiques, à potentiel cancérigène, mutagène et reprotoxique. La manipulation des cytotoxiques en établissements de soins vétérinaires s'inscrit pleinement dans le cadre de bonnes pratiques vétérinaires, mais également dans un cadre législatif strict de protection du personnel. En médecine humaine, des études récentes recommandent un suivi régulier des surfaces de manipulation des substances cytotoxiques, afin d'ajuster au mieux les procédures standardisées de manipulation des substances cytotoxiques et de protection du personnel. L'objectif de l'étude est d'évaluer différents protocoles de nettoyage d'un plan de travail après contamination par la doxorubicine et le cyclophosphamide, deux substances cytotoxiques couramment utilisée en oncologie vétérinaire.

Matériel et méthodes

Cette étude est prospective, unicentrique. L'ensemble des mesures a été réalisé sur un plan de travail en résine synthétique, situé sous une hotte à flux laminaire vertical. Le plan de travail était divisé en carrés d'étude d'une surface standardisée de 100 cm². L'ensemble des manipulations a été réalisée par un seul opérateur afin de limiter le biais interpersonnel. La contamination a été réalisée de manière standardisée à l'aide de 200µg de doxorubicine, et 500 µg de cyclophosphamide. Chaque surface a ensuite été nettoyée selon avec un détergent donné, et selon une méthodologie donnée. Après nettoyage, la contamination par les substances cytotoxiques a été évaluée à l'aide du système de mesure rapide semi-quantitative des résidus cytotoxiques basé sur une technologie d'immunochromatographie en couche mince (BD HD Check®), en respectant les recommandations du fabricant quant à la méthode de prélèvement, le traitement de l'échantillon, et l'interprétation des résultats. Au cours de cette étude, 6 solutions détergentes ont été évaluées. Ces détergents ont été choisis sur base de leur accessibilité en établissement de soins vétérinaires, et des données disponibles dans la littérature quant à une éventuelle action contre les substances cytotoxiques. Huit méthodes de nettoyage ont été évaluées.

Résultats

Cinquante-quatre tests de recherche de résidus de cytotoxiques (27 tests pour les résidus de doxorubicine, et 27 tests pour les résidus de cyclophosphamide) ont été réalisés. Les contrôles négatifs et positifs ont permis de valider l'ensemble des mesures effectuées dans l'ensemble de l'étude. La répétition des mesures de résidus cytotoxiques a donné des résultats identiques à la fois pour la doxorubicine, et le cyclophosphamide, confirmant la répétabilité des résultats. Parmi les 6 solutions détergentes évaluées, seules les solutions d'hypochlorites de sodium ont permis l'élimination des résidus de doxorubicine. Les deux concentrations (2,4% et 4,8%) sont arrivées aux mêmes résultats. L'alcool à 70°, et les 3 solutions commerciales évaluées n'ont pas permis l'élimination des résidus de doxorubicine, quelle que soit la méthode de nettoyage appliquée. Aucune des solutions détergentes évaluées n'a permis l'élimination des résidus de cyclophosphamide. Les résultats des mesures de résidus étaient identiques quelle que soit la méthode de nettoyage appliquée. Aucune méthode de nettoyage ne semble donc supérieure à une autre. Le temps de pose du détergent n'a pas changé les résultats obtenus sur les mesures de résidus. La répétition des nettoyages n'entraine aucun changement dans les résultats de mesure des résidus. Même après 4 nettoyages consécutifs avec une solution d'hypochlorite de sodium, des résidus de cyclophosphamide ont été identifiés par les différentes mesures. La répétition de nettoyages avec des détergents différents n'a pas permis d'éliminer complètement les résidus de doxorubicine et de cyclophosphamide.

Discussion

Cette étude méthodologique met en évidence que lors d'une contamination importante par des cytotoxiques, seule une solution d'hypochlorite de sodium permet d'éliminer les résidus de doxorubicine. D'autre part, aucun détergent ou méthode particulière de nettoyage ne permet d'éliminer les résidus de cyclophosphamide en totalité. Les risques liés à la manipulation des cytostatiques utilisés en chimiothérapie sont clairement identifiés depuis la publication du rapport de l'ANSES en 2022, et des mesures de protection précises sont légalement définies à la fois en médecine vétérinaire, mais également dans le cadre du code du travail. Au regard des résultats de cette étude, il apparait important de recommander :

• l'utilisation systématique d'un champ de préparation stérile et non absorbant sur le plan de travail servant à la préparation des agents cytotoxiques. La manipulation sous un poste de sécurité cytotoxique est d'autre part fortement recommandé ;
• une protection maximale du personnel avec des équipements étanches adaptés ;
• un plan de contrôle des résidus, aussi régulièrement que possible.

Conclusion

Lors de manipulation de substances cytotoxiques, le praticien doit garder à l'esprit la persistance de résidus dans l'environnement quels que soient la méthode et le détergent employés. L'utilisation dans le cadre d'un plan de contrôle qualité d'appareils de mesure des résidus peut permettre d'adapter les méthodes et procédures de préparation et d'administration des cytotoxiques au sein de l'établissement.

Introduction

Les cytoblocs sont des préparations à l'interface entre la cytologie et l'histologie qui peuvent être d'une aide précieuse dans la démarche diagnostique, pronostique et thérapeutique. Ils permettent en particulier le phénotypage cellulaire, qui consiste à rechercher l'expression de marqueurs cellulaires spécifiques (Cluster de Différenciation (CD), molécules antigéniques structurales ou fonctionnelles, activité enzymatique…). C'est un outil répandu en pathologie vétérinaire, notamment pour le diagnostic en oncologie. Il repose principalement sur l'utilisation de colorations spécifiques, le recours à l'immunohistochimie, l'immunocytochimie ou la cytométrie en flux. 1.

Intérêts et réalisation des cytoblocs

Place du cytobloc dans les outils de phénotypage cellulaire.

L'immunohistochimie est réalisée sur des tissus (biopsie ou pièce d'exérèse) tandis que l'immunocytochimie est pratiquée à partir d'étalements issus de liquides biologiques (sang, épanchement, liquide synovial,...) ou de cytoponctions à l'aiguille fine d'organes ou de tissus. Cette seconde méthode est cependant souvent limitée par la difficulté technique d'effectuer des immunomarquages sur des étalements, les réactifs validés en histologie n'étant pas le plus souvent utilisables sur des frottis. Les cytoblocs permettent que les liquides biologiques soient traités et conservés dans des blocs de paraffine comme des préparations histologiques, étendant ainsi la détection possible à l'ensemble des marqueurs validés en immunohistochimie, dans un but diagnostique et pronostique.

Réalisation pratique du cytobloc.

Trois techniques différentes peuvent être utilisées pour générer un cytobloc [1-5] (Figure 1).

• Les méthodes dites de Liverpool et de Porto, respectivement réalisées à partir d'un microtube et d'un tube à microhématocrite, avec fixation au formol.
• La méthode HistogelTM, réalisée sans fixation au formol. Les pastilles cellulaires obtenues sont transférées dans une cassette et incluses en paraffine.
• Le reste du traitement relève des techniques (immuno)histochimiques classiques.

Figure 1

Illustrations cliniques

• Un cas d'épanchement pleural et abdominal d'origine indéterminée chez un chat européen de 14 ans. Un chat européen mâle stérilisé de 14 ans est référé pour un épanchement bicavitaire non lié à une cardiopathie. Une première analyse cytologique de l'épanchement pleural met en évidence de rares cellules atypiques d'histogénèse non élucidée, pouvant correspondre à des cellules épithéliales tumorales (carcinomatose) ou à des cellules mésothéliales réactionnelles ou tumorales (mésothéliome). Un cytobloc du liquide est envoyé au laboratoire en vue d'un phénotypage cellulaire, pour rechercher les marqueurs suivants : pancytokératine, vimentine et desmine[2]. Un marquage cytoplasmique intense est observé pour la pancytokératine, les marquages vimentine et desmine sont négatifs, en faveur d'une origine épithéliale et non mésothéliale des cellules suspectes et corroborant ainsi l'hypothèse d'une carcinomatose (Figure 2), précisant ainsi le pronostic (exclusion d'une origine réactionnelle). Par la suite, une masse pulmonaire a été mise en évidence par imagerie et l'examen cytologique de ponctions de cette masse et d'un ganglion régional, est en faveur d'un carcinome d'origine probablement bronchique avec métastase ganglionnaire.

Figure 2

• Un cas d'épanchement pleural associé à une masse médiastinale chez un chat européen de 8 ans. L'épanchement pleural d'un chat européen de 8 ans présentant une masse médiastinale est envoyé au laboratoire. L'analyse cytologique permet d'établir un diagnostic de lymphome, mais la taille intermédiaire des cellules rend le grade cytologique équivoque. L'examen immunohistochimique réalisé sur cytobloc comprend la recherche des antigènes CD3, CD20 et Ki-67. Les cellules tumorales expriment le marqueur CD3 mais pas le marqueur CD20. L'index de prolifération Ki-67 est d'environ 50%. L'ensemble de ces résultats d'immunomarquage est compatible avec un lymphome T de haut grade de malignité.
• Un cas de leucocytose marquée chez un chien Le frottis sanguin et le myélogramme d'une chienne Malinois femelle non stérilisée de 12 ans est envoyé au laboratoire pour l'exploration d'une leucocytose marquée (114x103/µL). A l ‘examen du frottis sanguin, des blastes peu différenciés sont identifiés, ces derniers n'expriment pas d'activité myélopéroxydasique à l'examen cytochimique. Un cytobloc de la couche leucocytaire permet un examen immunohistochimique, qui révèle des blastes CD3+, CD20- et CD117-, en faveur d'un lymphome T en phase leucémique (stade V). Les données internes du laboratoire et celles de la littérature montrent que ce type de lymphome est associé à des durées de survie plus courtes (CD3- : MST = 389 jours, CD3+ : MST = 159 jours), ce qui permet au clinicien d'informer correctement le propriétaire sur le pronostic de la maladie.

Conclusion

Les cytoblocs sont des préparations facilement réalisables au chevet du patient à partir de divers liquides biologiques. Ils permettent d'aider le clinicien, en s'appuyant sur un laboratoire vétérinaire pratiquant des immunomarquages, à établir le diagnostic, le pronostic et guider la conduite thérapeutique, en particulier en oncologie et en hématologie.

Bibliographie

1. Wallace, et al. VCP, 2015
2. Milne, et al. VCP, 2021
3. Jing, et al. Am J Clin Pathol, 2013
4. Marcos, et al. VCP, 2017
5. Marcos, et al. VCP, 2019